Текущее время: 16 май 2021, 06:44

Часовой пояс: UTC + 5 часов




Начать новую тему Ответить на тему  [ 1 сообщение ] 
 14. Методы оценки белков 
Автор Сообщение
Сообщение 14. Методы оценки белков
Наиболее точные данные о величине, форме, конформации белковой молекулы можно получить только с помощью метода рентгеноструктурного анализа (РСА).

Основное ограничение - это необходимость иметь белок в твердом кристаллическом состоянии. Для большинства же белков сведения об их структуре получены с помощью менее совершенных и более простых физико-химических методов, позволяющих выполнять анализ в растворах. Эти методы позволяют определить основные физико-химические параметры макромолекул, и уже на основании этих характеристик делать определенные заключения о форме и размерах белковых молекул. В число этих параметров входят:

* молекулярная гомогенность,
* молекулярная масса,
* коэффициент диффузии,
* вязкость растворов белков

Молекулярная гомогенность характеризует число и относительное содержание различных видов белковых молекул в исследуемом образце. Методы, которые позволяют получить такую информацию основаны на законах движения частиц в растворах, помещенных в гравитационные (седиментация, ультрацентрифугирование) или электрическое (электрофорез) поля с высокой напряженностью.

Молекулярная масса (ММ) белковой молекулы может быть определена с различной точностью, разными методами. Основное, при определении ММ - это получение чистого гомогенного образца белка. Кроме того, важными параметрами при определении ММ являются: заряд молекулы, ее форма и степень гидратации. Так например, при измерениях скорости движения частицы надежные результаты получаются только для тех молекул, форма которых близка к сферической, т.е. для глобулярных белков. Отклонение от сферической формы (фибриллярные белки) и гидратация приводит к различным погрешностям из-за увеличения коэффициента трения при движении молекул в растворе или возрастания их эффективного размера. В тех случаях, когда белок не является монодисперсным, результаты измерений усредняются (см. среднечисленная и средневесовая ММ.)

Коэффициент диффузии (D) является одним из тех параметров, которые достаточно отчетливо “реагируют” на форму белковой молекулы. Однако, только на основании величины D можно сделать лишь весьма приближенные заключения о размерах и форме молекул. Чаще, если известна ММ, вычисляют величину так называемого фрикционного отношения (f/f0). Здесь - f- экспериментально измеренная величина коэффициента трения, f0 - идеальный коэффициент трения - величина коэффициента f для негидратированных молекул той же массы, что и белок, с идеальной сферической формой. Чем больше величина фрикционного отношения отклоняется от единицы, тем более “вытянутую” форму имеет молекула белка. Никакой другой (более определенной) информации о форме белковой молекулы значение фрикционного отношения не несет, хотя в ряду белков она и может быть довольно наглядной относительной характеристикой отклонения формы от сферической .

Вязкость раствора является, по-видимому, самой простой мерой асимметрии растворенных макромолекул. Вязкость белковых растворов определяют, как правило, методом вискозиметрии. Его суть состоит в измерении скорости истечения раствора из капилляра под действием силы тяжести и сравнении этой скорости со скоростью истечения чистого растворителя в тех же условиях. По увеличению времени истечения белкового раствора судят о его характеристической вязкости. Характеристическая вязкость белкового раствора сравнительно невелика, если его молекулы имеют сферическую форму. Она заметно возрастает при переходе к элипсоидным и особенно палочковидным формам при той же ММ белковых молекул их концентрации в растворе. Поэтому, измерения вязкости широко используется для обнаружения изменений в форме молекул.

_________________
http://splav-katamaran.ru | http://katamaran-ural.ru - Прокат катамаранов и организация сплавов по рекам Урала! Екатеринбург. +79501965005 katamaran.ural@mail.ru


29 май 2009, 12:12
Профиль Отправить личное сообщение
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ 1 сообщение ] 

Часовой пояс: UTC + 5 часов



Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 1


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
cron
Powered by phpBB © phpBB Group.
Designed by Vjacheslav Trushkin for Free Forums/DivisionCore.
Вы можете создать форум бесплатно PHPBB3 на Getbb.Ru, Также возможно сделать готовый форум PHPBB2 на Mybb2.ru
Русская поддержка phpBB